CCK-8實驗可檢測細(xì)胞活力、增殖、細(xì)胞毒性等，廣泛應(yīng)用于藥物篩選等臨床前實驗研究。
1. 細(xì)胞鋪板
將檢測細(xì)胞對象按照合適的細(xì)胞濃度接種到96孔板，一般來說，每個孔這種3000-5000個細(xì)胞就可以了。當(dāng)然如果是檢測細(xì)胞增殖的話，可以降低細(xì)胞濃度，細(xì)胞過密會抑制細(xì)胞增殖。尤其對于貼壁細(xì)胞，細(xì)胞過密會出現(xiàn)細(xì)胞脫板現(xiàn)象，嚴(yán)重影響實驗結(jié)果?；旧?6孔板的邊緣不接種細(xì)胞，但加入培養(yǎng)基或PBS以排除邊緣效應(yīng)。每個組做3個復(fù)孔。
2. 加藥刺激
細(xì)胞鋪板后，按照實驗設(shè)計的時間點(diǎn)加入藥物刺激。藥物一般需要等比或者對倍稀釋，這里就不詳細(xì)贅述了。在加藥物前細(xì)胞清洗2遍，這里要強(qiáng)調(diào)一點(diǎn)就是細(xì)胞拍板的時候力度要掌握好，輕了培養(yǎng)液拍不干凈，重了會使細(xì)胞脫落。加藥時*是用排槍加，此時不要讓培養(yǎng)基中產(chǎn)生氣泡。
3. 加CCK-8孵育，上機(jī)檢測
每孔加入10微升CCK8溶液，同時避免產(chǎn)生氣泡。也可根據(jù)實驗需要調(diào)整加入CCK8的量，但是組間要統(tǒng)一。加入CCK8后，避光孵育1-4小時后，酶標(biāo)儀檢測OD450 nm處吸光值。
整個過程看似簡單，但有幾個地方要特別注意，包括細(xì)胞接板的密度、洗細(xì)胞時不要將細(xì)胞拍脫落、加藥和CCK8溶液時不要產(chǎn)生氣泡。注意這幾點(diǎn)，基本上CCK8實驗就能做出重復(fù)性較好的結(jié)果了。
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